elisa实验原理,Elisa的原理

elisa实验原理，Elisa的原理？

基本原理 ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术。固定在载体表面的抗原或者抗体不会失活,仍然保留其免疫反应性。

经络与筋膜是什么关系？

现代经络研究及其与筋膜的关系

经络的现代研究始于20世纪50年代，学者从探讨经络循经感传现象的发生机理机制和经络循行路线的物质基础着手，应用科学 和手段，深入探讨了经络物质组成和结构特点等。国内一直遵循“肯定现象，掌握规律，提高疗效，阐明本质”的经络研究16字方针，其中的“肯定现象，掌握规律，提高疗效”3个方面已取得了显著成果，而“阐明本质”则成为当今经络研究的热点[13]。

有者将经络的研究分为四大主流学派：神经生理学派（神经传导学说）、生理生化学派（体液循环学说）、生物物理学派（生物场学说）和整体间隙学派（结缔组织结构学说）[14]。其中神经生理学派代表人物如早期我国著名学者张锡均的“经络-大脑皮层-内脏相关”学说，孟昭威的第三平衡论生物全息论学说，张秉武的“波导论”学说等，这些学说

当时曾受到国际上高度重视，日本学者在评价我国经络学研究所取得成就时曾一一加以介绍[15]。生理生化学派的学者对P物质（SP）、降钙素基因相关肽（cGRP）、神经激肽A（NKA）和组织胺等多种递质的观察，并结合经穴处Ca2+离子浓度的研究后认为，经络是***激活交感神经并促进这种信号传递的结果[16-17]。生物物理学派的祝总骧教授在1988年10月25日的国际经络生物物理研讨会上正式宣布：“经脉线不是一条简单的单一结构和功能的线，而是多层次、多形态、多功能的立体结构”[18]。此理论的提出在世界上为之一次。

整体间隙学派——结缔组织结构学说在近年来愈来愈广受重视，结缔组织将有很大潜力。当经络研究的热点集中到“阐明本质”的最终一步时，整体间隙学派的研究近年来愈来愈被广受重视。随研究的深入，学者们提出应从中医理论的整体性角度来认识或入手研究经络的本质，基于发育生物学的基本原理，研究的靶点描准了机体的固有结缔组织。国内学者通过声测经络技术，对切皮前后、切断筋膜组织前后的家兔十四经脉中各经某一穴位声波波幅值变化进行分析，并以此为依据，采用***相关穴位开展家兔模型实验，验证了经脉线附着于筋膜组织，为经络的物质基础研究提供了新的实验依据[19-21]。同时国外亦有学者提出针灸经穴 是间质结缔组织 表象的假说，并应用虚拟人体数据，推断机体的结缔组织与针灸作用的发挥有关，其中来源于人体胚胎中胚层间充质衍变的结缔组织可能起到潜在的重要整合角色，该推断得到了Elisa E Konofagou在结缔组织分裂位面超声影像实验的支持[22-24]。同样南方医科大学原林教授及其研究团队在国家“863”计划的“中国数字人研究”课题研究中，对人体结缔组织的标记和三维重建后，发现了与中医“经络”走行接近的影像结构，通过图像分割和三维重建，构建出人体全身筋膜结缔组织的结构支架，使人体经络初步实现可视化。并对经典14条经线的361个穴位及***深度，在与虚拟人比对基础上，通过标记和计算机重建，已成功构建出与传统“经络-穴位”记载有很强对应性的结缔组织结构影像。研究中可见：四肢、颈根部和面部经穴大多定位于肌间隔疏松结缔组织聚集处，少数定位于神经血管束的结缔组织；躯干经穴大多定位于有多条感觉神经末梢交汇处，少数定位于器官门的结缔组织；头颅部经穴大多定位于神经末梢分布的真皮层的致密结缔组织和皮下疏松结缔组织层。并提出了一个机体新的功能系统即支持与储备系统假说，与支持与储备系统相关的学科领域称“筋膜学”，与之相关的理论学说称“筋膜学说”[25-28]。这不但为经络的物质基础研究提供了具有说服力的实验依据，还提供了经络本质研究的新思路和原创性的理论假说。

历代经典医书对经络的描述，则与现代标记技术和计算机重建所得对筋膜的描述有惊人的相似：经络是运行气血、联络脏腑、沟通内外、贯串上下的径路。而人体的筋膜系统，同样也联络内外、交通上下。在用数字人技术进行标记建模中发现：四肢经穴大多数定位于肌间隔疏松结缔组织聚集处，少数定位于神经血管束结缔组织；躯干经穴大多数定位于有多条感觉神经末梢交汇处，少数定位于器官门结缔组织；头颅部经穴多数定位于神经末梢分布的真皮层致密结缔组织层和皮下疏松结缔组织层；颈根部和面部经穴定位于肌间隔疏松结缔组织聚集处。所以，有研究学者提出：经穴是能引起结缔组织中的生物感受器产生较强生物学信息（神经信息、细胞信息、生化信息）的部位。一个尚未被现代生物医学重视和命名的功能系统和依此系统为研究对象的学科领域“筋膜学”也由此被提出，相信以该原创理论为依据开展涉及针灸和经络生物学实质的研究，将使我国的传统医学研究进入到一个全新的历史阶段[25-28]。

筋膜学说认为，筋膜在人体不同部位呈现出结构的多样性，由浅入深依次分为：①真皮致密结缔组织；②皮下疏松结缔组织（浅筋膜）；③肌肉表面疏松结缔组织（深筋膜）；④肌间膈和肌间隙结缔组织；⑤内脏器官门、被膜和内部间膈结缔组织。这5类筋膜在人体内部构成了完整的支架体系。由于在对数字人全身结缔组织进行计算机三维重建过程中，研究者发现了与古代文献记载经络走行相似的串珠状经线结构，从筋膜的功能学角度出发，提出筋膜极有可能就是经络的解剖基础。通过计算机三维图像处理软件结合曲线弥合线性分析 ，在重建的虚拟人体上，对这种筋膜重建经线与经典经络线体表走行进行对比研究。结果显示，人体筋膜三维重建经线体表分布与中医古代文献记载的经络走行线路高度相似，从而认为人体筋膜极有可能就是经络的解剖学实质，其中“穴位”是富含神经感受器和活性细胞而能产生较强生物信息的结缔组织聚集处，而“经脉”则为“穴位”间具有解剖学结构相连或神经传入接近的筋膜结构。据此，由南方医科大学原林教授带领的研究团队，从生物进化和胚胎发育的角度，提出

了人体全身的结缔组织支架在神经和免疫系统的参与下构成以干细胞为核心的新的功能系统——支持与储备系统（对该系统本身机制以及与其他功能系统关系的研究称为筋膜学），并且拟在筋膜学原创理论研究基础上，从针灸理论研究的核心问题——“经络研究”与“针灸作用及作用机制研究”入手，希望能开展针灸和筋膜学机制相关的动物与临床研究，使针灸理论与筋膜学原创理论有机衔接，以期从筋膜学说角度揭示针灸作用的本质，在针灸理论研究中取得我国自主的原始创新理论突破[29-33]。

展望

科学发展的历史表明：科学的进步主要表现为科学理论中“说明部分”的不断更新，而当旧理论中说明部分被淘汰时，其纯粹的“描述部分”几乎可以整体地进入新理论，从而使新理论继承旧理论全部有价值的部分[34]。

在生物学研究中，经络学说的科学价值并不在于其循行路线本身，而在于由经脉循行图所示意的人体上下内外远隔部位间特定联系的规律。其基本内容包括：体表与体表之间的上下远端联系；体表与内脏之间的内外远端联系。故在经络研究中除应充分考滤中医学整体理论外，还应关注经络功能的研究。若能在严格的实验检验基础上，最终阐明经络的生物学基础，不仅对于针灸学发展产生重大影响，而且还将为促进生物信息学、发育生物学等多学科的发展做出重要贡献，乃至对整个中医药学现代化研究产生里程碑式的影响。随着“筋膜学说”相关研究的不断深入开展，揭示经络本质的曙光必将展示在世人面前。

艾滋病毒抗体抗hlv1？

这个问题包含三部分信息，艾滋病毒抗体，抗hiv1+2，酶免。现在给你一一解说。

一、艾滋病病毒抗体。艾滋病病毒侵入人体后会***人体的免疫系统产生抗体，但这种抗体并非中和抗体，并不能清除病毒，通俗得讲可以理解为人体免疫系统的一种本能反应。目前，艾滋病抗体检测是最常用的艾滋病病毒感染的实验室检测 ，通过检测HIV抗体可以间接判断是否被感染。

二、HIV1+2。HIV1和HIV2是艾滋病病毒主要的两种亚型，1+2表示检测的是HIV1和HIV2两种亚型的抗体。

三、酶免。全称为酶联免疫吸附测定法，即ELISA。它是实验室常用的一种检测 。应用范围广泛，最基本的原理就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。

所以，艾滋病毒抗体抗hiv1+2酶免的意思就是用酶免法检测艾滋病病毒1和2两种亚型的抗体。

蜜蜂气管螨怎样治？

感谢邀请：关于蜜蜂气管螨怎么治疗的问题，蜂部落认为治疗药物还是以我们常见的治疗药物为主，主要是气管螨比较特殊，不像大蜂螨和小蜂螨那么容易发现，不过非常幸运的一点是，截至目前为止，我国还没有发现有蜜蜂气管螨的存在，从这里我们可以知道的是，气管螨并不是中蜂的敌害，而是意蜂的敌害，而且在我国还没有发现，已经被我国列入到对外检疫对象中。下面我们就来仔细的了解一下个所谓的“气管螨”厉害在什么地方。

其实对于目前我国的养蜂来说，很多朋友最熟悉的蜂螨就是大蜂螨和小蜂螨，可以说很多就算是养殖意蜂的朋友也不知道有气管螨的存在，气管螨可以说在国外是曾经干过几场轰轰烈烈的大事的，可以说是曾经引发了很多国家的重视。

气管螨之所以说危害要大于大蜂螨和小蜂螨的原因主要是寄生的位置比较特殊，一般大蜂螨与小蜂螨主要寄生蜂群的部位是雄蜂蛹以及诱蜂和成年蜂身体上，虽然说在蜂蛹中的大小蜂螨我们杀灭困难，但是目前采用的断子杀螨 已经取得较好的效果，可以说蜂螨对于意蜂养殖人员来说已经不是什么难事。

气管螨之所以厉害主要是寄生的位置特殊，气管螨又叫武氏蜂盾螨，分为背蜂盾螨和外蜂盾螨以及游离蜂盾螨3个亚种，并不是像大蜂螨与小蜂螨那样寄生在蜜蜂的外表，而是寄生在蜜蜂的气管和气囊里面，这种寄生方式也导致了蜜蜂被气管螨寄生非常难以发现。

据相关资料记载，气管螨更先发现是在1904年的英国康瓦尔和怀特岛，随后传入欧洲大部分地区，后被认为是一种世界性的寄生满。据相关报道，除了瑞典、挪威、丹麦、新西兰澳大利亚和夏威夷之外，只要从欧洲引进蜂王的国家都发生了寄生满。

1904年到1919年，气管螨导致英国怀特岛蜜蜂连续死亡。

1980年到1982年，气管螨导致美国北部蜂群损失率达到九成。

1922年，美国国会由于欧洲气管螨的爆发，被迫禁止从欧洲国家进口蜜蜂，并且在全国进行了一次气管螨的大普查，但是这次普查并没有发现有气管螨，而是发现了背蜂盾螨和外蜂盾螨两个品种。

由于美国早期的时候曾引入过8个蜜蜂亚种，在1980年的时候在哥伦比亚发现了气管螨，并且迅速向北传播，很快达到克萨斯和其它几个州，导致美国北部蜂群损失率达到九成。

气管螨不但侵袭工蜂，就连雄蜂和蜂王也会被侵袭，这是不同于大蜂螨和小蜂螨的一点，一般大蜂螨和小蜂螨对蜂王没有什么危害，经过杀螨以后是不用换王的，而气管螨寄生蜜蜂的部位又是在蜜蜂的气管和气囊里面，所以气管螨对于蜜蜂的卵和虫蛹都不会构成威胁。

蜜蜂气管螨产卵和受精都在蜜蜂的气管里面进行，在蜜蜂体内繁殖，病情发展缓慢，在蜜蜂死亡之前，气管螨会离开蜜蜂的气管，转移到蜜蜂的头部和绒毛之间，有健康蜜蜂接触的时候雌螨又寄生到健康蜜蜂的气管，所以盗蜂与迷巢容易引发气管螨的传播，传播特点是，在热带地区冬季增长，夏季衰竭，与亚热带地区相似。

之一：外观判断

气管螨由于个体比较小，所以我们发现比较困难，在国外一般通过蜜蜂的外形来进行判断。一般被气管螨入侵的蜂群表现为蜂群群势下降，爬蜂和“K”形翅膀，严重的气管螨会导致蜜蜂的两翅膀脱落，在地面上爬行，病蜂身体颤抖，发生痉挛，最后衰竭死亡。曾经这些特征被用来诊断气管螨的存在，但是后续又被否认，确定以解剖的方式来判断气管螨的存在。

第二：搅拌分离判断

据有关报道，检查气管螨存在的方式多达9种，但是均以解剖判断为主，其中受到认可的 主要是通过搅拌分离来查看。当时是采用厨房用的豆浆机来搅拌分离蜜蜂的胸部，然后让蜜蜂气管漂浮在上面，然后通过残渣来判断气管螨的感染情况。

第三：血清学诊断

血清学诊断是指使用ELISA技术进行血清学诊断，查看是否出现鸟嘌呤残基，原理是正常的蜜蜂在分解蛋白质的时候并不会出现鸟嘌呤残基，这种 得到了一些研究人员的支持和肯定。

之一：薄荷醇晶体治疗法

这种治疗方式是美国唯一授权的蜜蜂气管螨蜂药，这种药物主要是从野生薄荷上提取，但是这种药物的缺点是在温度较低的时候达不到理想的治疗效果，在温度较高的时候薄荷又会让蜜蜂产生趋避，只有在温度适中的时候使用， 是采用18乘以18厘米的塑料纱窗做成包装袋装入50克薄荷晶体，放在框梁上或者蜂箱底部。

第二：甲酸治疗法

甲酸治疗是将5毫升的甲酸装在10毫升的注册瓶中，让橡皮塞留下1厘米的小孔，然后从小孔中插入6厘米的灯芯，让灯芯露出1厘米，将注射瓶房子啊子脾下的箱底，蜂箱四周密封，但是巢门打开，每天加药5毫升，连续21天。

第三：生物治疗法

生物治疗法主要有两种，一种是干扰法，就是采用植物油糖饼放在巢框上，植物油糖饼散发出的味道会干扰雌螨寻找新的寄主，达到预防的目的。除了干扰法就是培育抗病能力强的蜂王，根据有资料记载，被商业化的Buckfast蜜蜂就能抵抗气管螨，而且被商业化使用。

分子生物学检验必背？

1、简述双抗体夹心法（ELISA）原理定义、操作过程、注意事项。

（1）原理定义：将可溶性的抗原或抗体吸附到固相载体上，并保持其免疫活性，使之结合并吸附结合抗体或抗原，通过洗涤去除未结合成分，再与酶标记的抗体或抗原结合，并保留酶的活性，然后加入酶反应的底物，后者被催化变为有色产物，根据反应颜色的深浅进行免疫反应的定性和定量的 。

（2）操作过程：

①用一直抗体包被固相载体；

②加入受检的标本（含待测抗原），使抗原与固相上的抗体结合；

③加入以辣根过氧化物酶标记的已知抗体，使之与抗原结合。标记的酶可催化底物（四甲基联苯胺）起显色反应，从而指示特异性抗原抗体反应的存在。

（3）注意事项：

①对倍稀释抗原混匀时不要产生太多气泡；

②酶标板要洗涤干净不要交叉污染；

③加样时从更低稀释度逐一加至更高稀释度。

2、比较聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳。

（1）相同点：都是电泳 ，可用于物质的分离与鉴定。

（2）不同点：前者利用蛋白质分子大小形状的差异进行分离，后者利用的是两性电解质形成的光滑pH使蛋白质停留在与其pI相等的位置上进行分离；前者有扩散的作用，后者无扩散作用，因而物质更集中，分辨率高；电泳时间加长，前者电泳效果会变差，后者可使同一蛋白区带更狭窄，利于分辨。

3、比较向聚丙烯酰胺薄膜层析和凝胶柱层析。

（1）相同点：都是层析 ，可用于分离物质；固定相均为固体，流动相均为液体；与分离物质不发生反应，分离后可鉴定。

（2）不同点：前者属于特殊的吸附分配层析，后者属于分子筛层析；前者通过荧光观察判断分离物质，后者通过收集液的显色反应；前者原理与分离物质与聚丙烯酰胺薄膜形成氢键有关，后者利用分子颗粒大小有关。

4、使牛蛙红细胞细胞融合的试剂及其原理；红细胞计数。

（1）PEG；PEG具有强烈的吸水和凝聚沉淀蛋白质的作用，可改变细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂类分子发生分散和重组，引起细胞融合。

（2）计数：格子数；稀释倍数。

5、两种核酸提取的基本要求和鉴定 。

（1）DNA

基本要求：保持DNA大分子的完整性及纯度；避免机械张力剪切，操作轻柔；注意对杂质蛋白和RNA的去除；防止DNA酶对DNA的降解。

鉴定 ：A260/A280比值在1.8左右；琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光显色，观察条带。

（2）RNA

基本要求：全程要防止RNA酶污染，对实验器具要预先处理，可加入特异性RNA酶抑制剂，实验中要佩戴一次性口罩手套。

鉴定 ：A260/A280比值在2.0左右；琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭荧光显色，观察28S亮度是否为18S两倍。

6、PCR的原理以及反应体系中各组分的作用。

（1）PCR原理：

该技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的情况下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段DNA片段来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3’-OH末端，并以此为起点，沿模板5’→3’方向延伸，合成一条新的DNA互补链。而新合成的链又可作为下一轮反应的模板，如此循环往复，每循环一次，DNA分子数即按指数倍增（2n）。

（2）反应体系中各物质作用：

①模板DNA：DNA***模板；

②引物：开始阶段结合到DNA模板的一段互补序列部位，启动DNA双链的合成；

③4种脱氧核苷酸：合成DNA原料；

④耐热的DNA聚合酶：催化DNA链合成；

⑤适宜的缓冲液：维持合适pH，以保持酶的活性并帮助DNA解除缠绕结构。

7、小鼠脾单个核细胞的分离，离心后从上到下都是什么成份；分离的原理；淋巴细胞浓度的计算。

（1）从上到下分别是：稀释的血浆；单个核细胞；粒细胞；红细胞。

（2）原理：本次实验根据颗粒沉降原理，将不同密度的小鼠脾脏细胞置于淋巴细胞分离液上进行水平式离心，使单个核细胞在其沉降运动中位于分离液洁面上；达到分离小鼠脾单个核细胞的目的。已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的密度约为1.088，而红细胞与粒细胞的密度均大于1.088。因此，用密度为1.088±0.001的淋巴细胞分离液通过密度梯度离心 ，可从小鼠脾脏细胞分离得到单个核细胞。

（3）计数：格子数；稀释倍数。

8、简述对流免疫电泳原理。

对流免疫电泳是电泳技术与双向琼脂扩散技术相融合而形成的一种定向加速的凝胶内免疫沉淀反应。与双向琼脂扩散技术中抗原与抗体分别向四周自由扩散不同，对流免疫电泳在凝胶中加一直流电场，抗原和抗体受到电泳和电渗两种力量的综合作用而向某一方向定向加速移动，因此可以提高灵敏度，明显缩短反应时间。

9、写出2种蛋白质定量 ，并择一详述。

（1）标准曲线法；标准管法。

（2）标准曲线法：双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与 铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行鉴定。

10、简述等电聚焦电泳中Ampholine& AP & TEMED、聚酰胺薄膜、秋水仙素、细胞融合中PEG、DNA纯化中EDTA & SDS、CDC实验中石蜡油 & 抗淋巴血清 & 细胞培养液 & 补体 & 锥蓝的作用。

（1）Ampholine：在直流电场作用下，能从正极到负极形成一个pH逐渐升高的平滑连续而且稳定的pH梯度，从而在电泳中实现等电点不同的物质的分离；

AP：引发凝胶的聚合；

TEMED：加速凝胶的聚合。

（2）聚酰胺薄膜：由于分离物质和展层剂的不同，其与聚酰胺薄膜上的酰胺基团竞争形成氢键的能力也不同，从而可以利用其泳动速度差异，实现不同种物质的分离。

（3）秋水仙素：抑制纺锤体形成，使细胞周期停留在中期，便于观察。

KCl低渗溶液：使得细胞膨胀，利于中期染色体的观察。

（4）PEG：具有强烈的吸水和凝聚沉淀蛋白质的作用，可改变细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂类分子发生分散和重组，引起细胞融合。

（5）EDTA：络合二价金属离子，当Mg2+被络合后，细胞内释放出来的DNA酶被抑制，避免DNA的降解，同时金属离子络合后，细胞膜稳定性下降，有利于膜的裂解；

SDS：使蛋白质变性，能破坏膜蛋白的构象，使膜裂解，又能使***白中的核酸与蛋白质解离，并且SDS也具有抑制DNA酶的作用。

（6）石蜡油：密封细胞反应板，防止污染，利于孵育；

抗淋巴血清：作为抗体提供补体结合位点与补体结合，使其活化形成MAC；

细胞培养液：作为抗体的阴性对照；

补体：与抗体的补体结合位点结合，活化形成MAC，检测是否有特异性抗原；

锥蓝：使死细胞着色，通过光学显微镜观察，可以测得死细胞百分率。